Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶

Cat. #：P1041，P1042，P1043，P1044

產品簡介

東盛生物Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶是一種創新型的類抗體技術修飾熱啟動酶，該酶在室溫下活性被完全封閉，依賴溫度激活酶活性，可有效減少非特異性擴增，具有非常高的特異性。擴增片段長度可達5 kb（簡單模板）。延伸速率為2min/kb（70-75℃，簡單模板可達20s/kb）。該酶具有5'→3'聚合酶活性，無3'→5'外切酶活性。擴增產物具有3'-dA末端。Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶采用先進的生產技術，動物源性DNA污染為零，穩定性更強，具有抗體法熱啟動酶不可比擬的優勢。同時，預變性時間縮短至3分鐘，工作效率比大多數化學修飾法熱啟動酶更高，是一款非常新穎、實用的產品。

產品組成

[1] 10× Hotstart Buffer分為Mg²⁺ Plus與Mg²⁺ Free兩種包裝，可方便選擇。如無特別說明提供Mg²⁺ Plus緩沖液。Mg²⁺ Free的10× Hotstart Buffer提供25 mM MgCl₂。

[2] P1044不含6× Loading Buffer，如有需要請單獨購買（Cat. #：M9041）。

本產品不含dNTPs，如有需要請單獨購買（Cat. #：P9011/P9012/P9013）。

活性定義

一個活性單位（U）指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內，攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存條件

-20℃保存2年。

質量控制

純度檢測：經質量檢測，產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測：PCR方法檢測無宿主殘余DNA，能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

應用舉例

1. 配制反應體系

請于冰上配置反應體系，體系大小與組分用量與添加順序可調整：

[1] 引物終濃度建議范圍：0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度，效率低時可提高濃度。

[2] 根據目的片段擴增的難易程度調整DNA聚合酶的用量。

[3] 不同模板最佳用量不同，部分DNA模板建議用量如下表（50 μl反應體系）。

[4] 可單獨訂購超純水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[5] 可單獨訂購25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。

2. 設定反應程序進行PCR反應

[1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。

[2] 延伸時間按2min/kb來設最佳（簡單模板可達20s/kb）。

3. 分析結果

將產物與loading buffer混勻后進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要，可進行割膠回收。

無產物或產物量少的改進措施有：1調整退火溫度；2減少抑制劑的影響，如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分，需要高倍稀釋（1: 10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脫，提高模板DNA的純度；4使用PCR添加劑，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高產量。

操作注意事項

1 本產品采用改進的類抗體修飾技術，依賴溫度激活DNA聚合酶，能有效抑制非特異性結合，可在室溫下配置反應體系。

2 Hotstart Taq DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性，因此在PCR產物3'末端通常會加上1個多余的脫氧腺嘌呤核苷，可直接用于TA克隆。

引物設計注意事項

引物長度一般在15-30個堿基之間；上下游引物3’末端避免互補，避免出現3個以上重復的G或C，或出現發夾結構，否則會產生非特異性擴增；GC含量控制在40-60%，且上下游引物GC含量盡量接近；Tm值控制在55-65℃之間，且上下游引物Tm值盡量接近，額外附加序列（酶切位點、修飾等）是非模板匹配序列，不參與Tm值計算。

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