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      產品中心 > PCR相關產品 > Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(P1041-P1042-P1043-P1044)

      Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(P1041-P1042-P1043-P1044)

      促銷: 494.00~24700.00

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      P1041(250U) P1042(1000U) P1043(3000U) P1044(18000U)

      Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶

      Cat. #P1041,P1042,P1043,P1044

      產品簡介

      東盛生物Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶是一種創新型的類抗體技術修飾熱啟動酶,該酶在室溫下活性被完全封閉,依賴溫度激活酶活性,可有效減少非特異性擴增,具有非常高的特異性。擴增片段長度可達5 kb(簡單模板)。延伸速率為2min/kb70-75℃,簡單模板可達20s/kb)。該酶具有5'→3'聚合酶活性,無3'→5'外切酶活性。擴增產物具有3'-dA末端。Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶采用先進的生產技術,動物源性DNA污染為零,穩定性更強,具有抗體法熱啟動酶不可比擬的優勢。同時,預變性時間縮短至3分鐘,工作效率比大多數化學修飾法熱啟動酶更高,是一款非常新穎、實用的產品。

      產品組成

      Component

      P1041

      250U

      P1042

      1,000U

      P1043

      3,000U

      P1044

      18,000U

      Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(5U/μl

      50 μl

      200 μl

      200 μl × 3

      100 μl× 36

      10× Hotstart BufferMg2+ Plus[1]

      1.25 ml

      1.25 ml× 2

      1.25 ml × 6

      1.25 ml × 36

      6× Loading Buffer[2]

      1 ml

      1 ml

      1 ml

      -

      [1] 10× Hotstart Buffer分為Mg2+ PlusMg2+ Free兩種包裝,可方便選擇。如無特別說明提供Mg2+ Plus緩沖液。Mg2+ Free10× Hotstart Buffer提供25 mM MgCl2。

      [2] P1044不含6× Loading Buffer,如有需要請單獨購買(Cat. #M9041)。

      本產品不含dNTPs,如有需要請單獨購買(Cat. #P9011/P9012/P9013)。

      活性定義

      一個活性單位(U)指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃、30 min內,攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

      保存條件

      -20℃保存2年。

      質量控制

      純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

      功能檢測:PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

      應用舉例

      1. 配制反應體系

      請于冰上配置反應體系,體系大小與組分用量與添加順序可調整:

      Ordinal

      Component

      Volume

      (50 μl reaction volume)

      Final   concentration

      (50 μl reaction volume)

      1

      10× Hotstart BufferMg2+ Plus

      5 μl

      2

      dNTPs2.5mM

      4 μl

      0.4 mM

      3

      upstream primer (10 μM)[1]

      2 μl

      0.4 μM

      4

      downstream primer (10 μM)[1]

      2 μl

      0.4 μM

      5

      Optimus? Hotstart Taq   DNA聚合酶(5U/μl[2]

      0.5 μl-1 μl

      2.5U-5U

      6

      template DNA[3]

      1-4 μl

      <1μg

      7

      超純水[4]

      To 50 μl

      -

      optional

      MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[5]

      Variable

      -

      [1] 引物終濃度建議范圍:0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度,效率低時可提高濃度。

      [2] 根據目的片段擴增的難易程度調整DNA聚合酶的用量。

      [3] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建議用量如下表(50 μl反應體系)。

      Template

      Dosage

      人類基因組DNA

      0.1μg-1μg

      λDNA

      0.5ng-5ng

      大腸桿菌基因組DNA

      10ng-100ng

      質粒DNA

      0.1ng-10ng

      [4] 可單獨訂購超純水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

      [5] 可單獨訂購25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

      2. 設定反應程序進行PCR反應

      Stage

      Temperature

      Time

      Number of Cycles

      Initial Denaturation

      94℃

      3 min

      1

      Denaturation

      94℃

      30 sec

      25-35

      Annealing

      55-68℃[1]

      30 sec

      Extension

      72℃

      Variable[2]

      Final Extension

      72℃

      5-10 min

      1

      [1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。

      [2] 延伸時間按2min/kb來設最佳(簡單模板可達20s/kb)。

      3. 分析結果

      將產物與loading buffer混勻后進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要,可進行割膠回收。

      無產物或產物量少的改進措施有:1調整退火溫度;2減少抑制劑的影響,如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分,需要高倍稀釋(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脫,提高模板DNA的純度;4使用PCR添加劑,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高產量。

      操作注意事項

      1 本產品采用改進的類抗體修飾技術,依賴溫度激活DNA聚合酶,能有效抑制非特異性結合,可在室溫下配置反應體系。

      2 Hotstart Taq DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性,因此在PCR產物3'末端通常會加上1個多余的脫氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。

      引物設計注意事項

      引物長度一般在15-30個堿基之間;上下游引物3’末端避免互補,避免出現3個以上重復的GC,或出現發夾結構,否則會產生非特異性擴增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量盡量接近;Tm值控制在55-65℃之間,且上下游引物Tm值盡量接近,額外附加序列(酶切位點、修飾等)是非模板匹配序列,不參與Tm值計算。

      相關產品

      名稱

      貨號

      規格

      PCR Mix

      P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

      1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

      Power Green qPCR Mix

      P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

      1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

      1kb ladder

      M1181/M1182

      50/250

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      R1011/R1012

      20/100

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