Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶
Cat. #:P1041,P1042,P1043,P1044
產品簡介
東盛生物Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶是一種創新型的類抗體技術修飾熱啟動酶,該酶在室溫下活性被完全封閉,依賴溫度激活酶活性,可有效減少非特異性擴增,具有非常高的特異性。擴增片段長度可達5 kb(簡單模板)。延伸速率為2min/kb(70-75℃,簡單模板可達20s/kb)。該酶具有5'→3'聚合酶活性,無3'→5'外切酶活性。擴增產物具有3'-dA末端。Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶采用先進的生產技術,動物源性DNA污染為零,穩定性更強,具有抗體法熱啟動酶不可比擬的優勢。同時,預變性時間縮短至3分鐘,工作效率比大多數化學修飾法熱啟動酶更高,是一款非常新穎、實用的產品。
產品組成
Component | P1041 250U | P1042 1,000U | P1043 3,000U | P1044 18,000U |
Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(5U/μl) | 50 μl | 200 μl | 200 μl × 3 | 100 μl× 36 |
10× Hotstart Buffer(Mg2+ Plus)[1] | 1.25 ml | 1.25 ml× 2 | 1.25 ml × 6 | 1.25 ml × 36 |
6× Loading Buffer[2] | 1 ml | 1 ml | 1 ml | - |
[1] 10× Hotstart Buffer分為Mg2+ Plus與Mg2+ Free兩種包裝,可方便選擇。如無特別說明提供Mg2+ Plus緩沖液。Mg2+ Free的10× Hotstart Buffer提供25 mM MgCl2。
[2] P1044不含6× Loading Buffer,如有需要請單獨購買(Cat. #:M9041)。
本產品不含dNTPs,如有需要請單獨購買(Cat. #:P9011/P9012/P9013)。
活性定義
一個活性單位(U)指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃、30 min內,攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
保存條件
-20℃保存2年。
質量控制
純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。
功能檢測:PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。
應用舉例
1. 配制反應體系
請于冰上配置反應體系,體系大小與組分用量與添加順序可調整:
Ordinal | Component | Volume (50 μl reaction volume) | Final concentration (50 μl reaction volume) |
1 | 10× Hotstart Buffer(Mg2+ Plus) | 5 μl | 1× |
2 | dNTPs(2.5mM) | 4 μl | 0.4 mM |
3 | upstream primer (10 μM)[1] | 2 μl | 0.4 μM |
4 | downstream primer (10 μM)[1] | 2 μl | 0.4 μM |
5 | Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(5U/μl)[2] | 0.5 μl-1 μl | 2.5U-5U |
6 | template DNA[3] | 1-4 μl | <1μg |
7 | 超純水[4] | To 50 μl | - |
optional | MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[5] | Variable | - |
[1] 引物終濃度建議范圍:0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度,效率低時可提高濃度。
[2] 根據目的片段擴增的難易程度調整DNA聚合酶的用量。
[3] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建議用量如下表(50 μl反應體系)。
Template | Dosage |
人類基因組DNA | 0.1μg-1μg |
λDNA | 0.5ng-5ng |
大腸桿菌基因組DNA | 10ng-100ng |
質粒DNA | 0.1ng-10ng |
[4] 可單獨訂購超純水(Cat. #:P9021/P9022/P9023)。
[5] 可單獨訂購25mM MgCl2(Cat. #:P9031)和PCR Enhancer(Cat. #:P9041)。
2. 設定反應程序進行PCR反應
Stage | Temperature | Time | Number of Cycles |
Initial Denaturation | 94℃ | 3 min | 1 |
Denaturation | 94℃ | 30 sec | 25-35 |
Annealing | 55-68℃[1] | 30 sec | |
Extension | 72℃ | Variable[2] | |
Final Extension | 72℃ | 5-10 min | 1 |
[1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。
[2] 延伸時間按2min/kb來設最佳(簡單模板可達20s/kb)。
3. 分析結果
將產物與loading buffer混勻后進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要,可進行割膠回收。
無產物或產物量少的改進措施有:1調整退火溫度;2減少抑制劑的影響,如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分,需要高倍稀釋(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脫,提高模板DNA的純度;4使用PCR添加劑,如PCR Enhancer(Cat. #:P9041)、MgCl2(Cat. #:P9031)等可提高產量。
操作注意事項
1 本產品采用改進的類抗體修飾技術,依賴溫度激活DNA聚合酶,能有效抑制非特異性結合,可在室溫下配置反應體系。
2 Hotstart Taq DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性,因此在PCR產物3'末端通常會加上1個多余的脫氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。
引物設計注意事項
引物長度一般在15-30個堿基之間;上下游引物3’末端避免互補,避免出現3個以上重復的G或C,或出現發夾結構,否則會產生非特異性擴增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量盡量接近;Tm值控制在55-65℃之間,且上下游引物Tm值盡量接近,額外附加序列(酶切位點、修飾等)是非模板匹配序列,不參與Tm值計算。
相關產品
名稱 | 貨號 | 規格 |
PCR Mix | P2011/P2012/P2013/P2014/P2015 | 1ml/5ml/10ml/50ml/100ml |
Power Green qPCR Mix | P2101/P2102/P2103/P2104/P2105 | 1ml/5ml/10ml/50ml/100ml |
1kb ladder | M1181/M1182 | 50次/250次 |
DSTM5000 | M1111/M1112 | 60次/300次 |
高純度質粒小提試劑盒 | N1011/N1012/N1013 | 50次/100次/200次 |
通用RNA提取試劑盒 | R1051 | 50次 |
基因組DNA快速提取試劑盒 | N1111/N1112 | 50次/100次 |
DNA凝膠回收試劑盒 | N1071/N1072/N1073 | 50次/100次/200次 |
RT-PCR Kit | R1011/R1012 | 20次/100次 |
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