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      產品中心 > 常規PCR Mix系列 > Plus Mix(P2031-P2032)

      Plus Mix(P2031-P2032)

      促銷: 260.00~1040.00

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      運費 ¥0.00
      P2031(1 ml(40次,50μl體系/次)) P2032(1 ml*5(200次,50μl體系/次))

      Plus Mix

      Cat. #P2031,P2032

      產品簡介

      Plus Mix濃縮的PCR擴增預混和溶液,含有Taq Plus DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等PCR擴增必需組分(模板與引物除外)。使用時,僅需在擴增體系中加入模板和引物即可進行PCR,大大簡化操作過程,縮短操作時間,降低污染(加樣次數減少)。同時,由于體系內含有優化劑與增強劑,能夠顯著增強PCR擴增的靈敏度。擴增產物具有兩種末端:平末端與3'-dA。

      Taq Plus DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶與Pfu DNA聚合酶的獨特比例混合物。其保真性是Taq DNA聚合酶的4倍,擴增片段的長度可達20 kb(簡單模板)。在擴增復雜模板(如GC-rich或重復序列)時,Taq Plus DNA聚合酶的擴增效率高于Taq DNA聚合酶,延伸速度為20s/kb70~75℃,簡單模板可達5s/kb)??捎糜趶碗s模板的PCR擴增。

      產品組成

      Component

      P2031

      P2032

      2× Plus Mix

      1 ml

      1 ml× 5

      超純水

      1 ml

      1 ml× 5

      本產品分含體系中包含溴酚藍、不含溴酚藍兩類。體系中包含溴酚藍的產品,PCR擴增產物可直接電泳檢測。這兩類產品的擴增性能無差異。如無特別說明提供體系中包含溴酚藍的包裝。

      保存條件

      -20℃保存2年。

      質量控制

      純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

      功能檢測:PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

      應用舉例

      1. 配制反應體系

      請于冰上配置反應體系,體系大小與組分用量與添加順序可調整:

      Ordinal

      Component

      Volume

      (50 μl reaction volume)

      Final   concentration

      (50 μl reaction volume)

      1

      2× Plus Mix

      25   μl

      2

      upstream   primer (10 μM)[1]

      2 μl

      0.4   μM

      3

      downstream   primer (10 μM)[1]

      2 μl

      0.4   μM

      4

      template   DNA[2]

      1-4   μl

      <1μg

      5

      超純水[3]

      To   50 μl

      -

      optional

      MgCl2(MgSO4)/PCR   Enhancer[4]

      Variable

      -

      [1] 引物終濃度建議范圍:0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度,效率低時可提高濃度。

      [2] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建議用量如下表(50 μl反應體系)。

      Template

      人類基因組DNA

      λDNA

      大腸桿菌基因組DNA

      質粒DNA

      Dosage

      0.1μg-1μg

      0.5ng-5ng

      10ng-100ng

      0.1ng-10ng

      [3] 可單獨訂購超純水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

      [4] 可單獨訂購25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

      2. 設定反應程序進行PCR反應

      Stage  

      Temperature

      Time

      Number   of Cycles

      Initial   Denaturation

      94℃

      3   min

      1

      Denaturation

      94℃

      30   sec

      25-35  

      Annealing

      55-68℃[1]

      30   sec

      Extension

      72℃

      Variable[2]

      Final   Extension

      72℃

      5-10   min

      1

      [1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。

      [2] 延伸時間按20s/kb來設最佳(簡單模板可達5s/kb)。

      3. 分析結果

      反應產物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要,可進行割膠回收。

      無產物或產物量少的改進措施有:1調整退火溫度;2減少抑制劑的影響,如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分,需要高倍稀釋(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脫,提高模板DNA的純度;4使用PCR添加劑,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高產量。

      操作注意事項

      1 室溫下Taq Plus DNA聚合酶有一定的活性,為避免發生非特異性擴增,請于冰上配置反應體系,并且最后添加Taq Plus DNA聚合酶或模板DNA。

      2 Taq Plus DNA聚合酶的擴增產物有兩種末端:平末端和3'-dA突出末端。如要進行TA克隆,請先進行加A反應,以提高克隆效率。(加A反應:參考如下體系,72℃,15-30min

      PCR(純化)產物

      1-7   μl

      10×   Taq BufferMg2+ Plus

      1   μl

      dATP  

      0.2   mM

      Taq   DNA聚合酶

      5U

      超純水

      To   10 μl

      引物設計注意事項

      引物長度一般在15-30個堿基之間;上下游引物3’末端避免互補,避免出現3個以上重復的GC,或出現發夾結構,否則會產生非特異性擴增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量盡量接近;Tm值控制在55-65℃之間,且上下游引物Tm值盡量接近,額外附加序列(酶切位點、修飾等)是非模板匹配序列,不參與Tm值計算。

      相關產品

      名稱

      貨號

      規格

      PCR Mix

      P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

      1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

      Power Green qPCR Mix

      P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

      1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

      1kb ladder

      M1181/M1182

      50/250

      DSTM5000

      M1111/M1112

      60/300

      高純度質粒小提試劑盒

      N1011/N1012/N1013

      50/100/200

      通用RNA提取試劑盒

      R1051

      50

      基因組DNA快速提取試劑盒

      N1111/N1112

      50/100

      DNA凝膠回收試劑盒

      N1071/N1072/N1073

      50/100/200

      RT-PCR Kit

      R1011/R1012

      20/100

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