PCR產物及DNA片段純化試劑盒
產品組分
貨號 | N1091 （50次） | N1092 （100次） | N1093 （200次） |
溶液BD | 20 ml | 40 ml | 80 ml |
溶液PE | 15 ml | 15 ml×2 | 20 ml×3 |
溶液Eluent | 2.5 ml | 5 ml | 10 ml |
DNA純化柱 | 50個 | 100個 | 200個 |
說明書 | 1份 | 1份 | 1份 |
● 溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋，即含80%乙醇。
● 溶液BD中含有變性劑，請不要直接接觸皮膚。
● 上述產品組分均可單獨購買，詳見產品索引。
產品說明
本產品采用傳統的硅膠柱膜吸附技術，用于從PCR或其他各種酶促反應液中純化DNA片段（50 bp-10 kb）。其純化原理是硅膠膜柱高效可逆地吸附體系中的DNA片段（高鹽、低pH值），同時去除酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他雜質，被吸附的DNA再在低鹽、高pH值條件下被洗脫純化。一次可回收30μg高純度DNA片段，此DNA片段可直接用于各種酶促反應等。
質量控制
從PCR擴增產物中純化50 bp和1,000 bp的DNA片段。
保存條件
室溫保存2年。
注意事項--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
● 溶液PE第一次使用前請按瓶上標簽加入4倍體積的無水乙醇，即15 ml溶液PE中加入60 ml無水乙醇，20 ml溶液PE中加入80 ml無水乙醇，使用后立即蓋緊蓋子。
● 本試劑盒適用于無選擇性的回收體系中所有的DNA 片段。如需選擇性回收特定片段，同時去除其他不同大小片段，建議選擇凝膠回收試劑盒。
● 本試劑盒純化柱的DNA吸附能力強。但如果DNA濃度小，或DNA初始量少，回收率將會偏低。
● 溶液Eluent（10 mM Tris-HCl, pH 8.5）中不含EDTA，其收集的DNA片段可直接用于各種酶促反應等，不會影響后續試驗。
● 為了保證回收效率，請不要使用未調整pH值的超純水洗脫目的片段。
● 請嚴格按照操作步驟操作。
操作步驟--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1 確定PCR反應液或其他酶促反應液的體積。將PCR反應液或其他酶促反應液轉移至一個新的1.5 ml離心管中，向其中加入等體積溶液BD，混合均勻。
2 將步驟1所獲溶液置于DNA純化柱中，靜置2min。
● 若溶液體積大于純化柱容積（700 μl），可分兩次加入。
3 12,000 rpm離心1min，棄濾液。
● 此時DNA片段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。
4 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm, 離心1min，棄濾液。
● 溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋，即含80%乙醇。
● 此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫，以獲得高質量DNA片段。
5 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm, 離心1min，棄濾液。
6 12,000 rpm離心3min，以徹底去除純化柱中的液體。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇，避免影響后續酶促反應。同時也利于DNA片段的充分溶解。
7 將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的中央處，懸空滴加30-100 μl溶液Eluent（60℃預熱），靜置2min。12,000 rpm離心1min，管底即為目的DNA片段。貯存于-20℃。
● 溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替，但其pH需為8.0-8.5，加入體積視DNA目的片段的多少、用戶對目的片段濃度要求而定。
● 對溶液Eluent 65℃預熱，會提高提取DNA目的片段的產量。
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